Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的反复中逐渐扩展

从第一次单单现家兔自身专一性到单单现1改进型心血管疾病病理副作用的困难重重率在婴幼儿时期就有很好的所述，多个家兔自身专一性非典型的婴幼儿中会有70%在人体内转换后10年内罹患心血管疾病，而随访15年的婴幼儿这一比重增大到84%。相比之下之下，占病理1改进型心血管疾病一半以上的改进型1改进型心血管疾病的病症机制还无法得到充分的研究。

越来越多的人开始选用不应于种系统来定义1改进型心血管疾病的困难重重：有机质在单单现多种家兔自身专一性时离开第1先决条件，单单现血糖精神状态时离开第2先决条件，单单现副作用时离开第3先决条件。一些多发家兔自身专一性非典型的有机质，在1期和2期，困难重重慢，并持续发展为病症的1改进型心血管疾病。我们以前所述了一分组在首次样品到多种家兔自身专一性取样后仅仅10年无心血管疾病的亦非慢困难重重者，这分组病患者数量少，但相似性非常明确。随后，我们发现家兔自身抗原专一性CD8+T肝细胞中间质在困难重重亦非快的病患者中会基本不存有，但在近期病症和与此系统性的心血管疾病病患者中会很较难样品到。这可能表明，与困难重重病患者相比之下，这些病患者致病中间质的调节增强。

现代研究表明，尽管调节性T肝细胞(Treg)数量正常，但心血管疾病病患者存有一些机制弱点，其中会包括对IL-2的中间质潜能提高。此外，心血管疾病病患者中会的现象CD4+T肝细胞可能对调节颇具抵抗性，表现为现象T肝细胞的减缓减慢，自然产生的Treg和质外产生的正向Treg，以及抗原境况的CD4+T肝细胞中会IL-2中间质减慢。本研究的目的是所述了CD4+调节性T肝细胞(Treg)在一小群亦非亦非快困难重重者中会的相似性，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方式：BOX研究是一项以人群为基础的纵向研究，在21岁以下病症的病患者亲属中会检查1改进型心血管疾病的危险因素。我们以前所述了长期亦非快困难重重者的相似性，他们保持多重家兔自身专一性非典型最多10年，但无法单单现心血管疾病的病理副作用，慢性或非透过性致病。随后，10名一直保持无心血管疾病并想要提供大量血液取样的亦非快困难重重者设为T和B肝细胞机制归纳。在迄今为止的研究中会，8名慢困难重重者(SP分组)，中会位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身专一性非典型。所有的大多数人都受制于1改进型心血管疾病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身专一性对某些抗原的非典型中间质，然而，一名病患者已经受制于2期仅仅6年，但无法单单现病理副作用，一名病患者被诊断为心血管疾病，该受测者72岁，在捕获检验取样时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据归纳中会对该遗传物质透过了单独指标。受控外周血单个核肝细胞(PBMCs)，选用多参数流式肝细胞法术和T肝细胞减缓试验指标遗传物质中会Treg的频带、表改进型和机制。选用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)透过无行政官员聚类归纳，指标Treg表改进型。

结果：与身心健康遗传物质相比之下，来自慢困难重重质的遗忘CD4+T肝细胞的行政官员聚类结果显示，酪氨酸的遗忘CD4+ Treg频带增大，与持续性正向的TNFR系统性受质(GITR)暗示增大有关。一名HbA1c下降时的病患者与困难重重亦非快者和反之亦然的大鼠相比之下，Treg可知有所并不相同。机制归纳表明，与身心健康遗传物质相比之下，来自亦非快困难重重质的Treg酪氨酸的CD4+现象T肝细胞减缓明显受损。表现为对现象CD4+T肝细胞CD25和CD134暗示的减缓增大。

平面图1 了解的表改进型归纳结果显示，CD4+Treg亚改进型在慢困难重重表头中会增大。由FlowSOM转化的Treg室，聚集在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -肝细胞上。根据上面物暗示鉴定单单10个元簇:遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;遗忘T cell_4;CD49b遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;线程Treg_1;线程Treg_2;线程Treg_3;和线程Treg_4。(a)选用9个并不相同Treg上面转化的10个元簇的MST。每个路由表代表者一个集群(100个集群)，大得多的元集群(10个元集群)在路由表分组周围上色。每个路由表中会的饼平面图暗示单个上面的暗示行政级别。(b)每个元聚类的热平面图，以结果显示全面性上面暗示。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化平面图，以及FlowSOM比对的每个元簇的很薄。(e-l)相对丰度为每个metacluster箱新点阵平面图(丰度> 0.05%)确定为HD和SP分组:线程Treg_2 (e),线程Treg_3 (f),线程Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞(h)、遗忘T cell_1(i),遗忘T cell_2 (j),遗忘T cell_3 (k) n d CD49b遗忘T肝细胞(l)。蓝色白点代表者**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验。此键适用于平面图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

平面图2 选用CITRUS的预测模改进型证实，Treg频带的增大是困难重重亦非快的徽章。分级旁路(a - f)和棉花归纳(g-k)比较SP大多数人和反之亦然的HD大多数人在CD4+CD45RA−T肝细胞上的差异。(a)表型CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表者性平面图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR暗示透过受控，三维FlowSOM族群。(b) HD(环纹)和SP(斑点)分组以及遗传物质SP 606(蓝色)中会CD25+ cd127的频带汇总平面图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+旁路侄集的箱新点阵平面图;(c) HLA-DRloGITR−(线程Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(线程Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(线程Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+线程T cell)。(g - i)油菜簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3暗示强度渐变，箭头突单单的簇被比对为SP和HD表头之间的并不相同。(j)箱新点阵平面图结果显示了在SP(斑点)和HD(灰点)分组中会，CITRUS遗忘Treg_3和Treg_4的相对丰度(比重)。(k)直方平面图结果显示每个簇的表改进型(蓝色)和Treg上面相对暗示与文化背景暗示(蓝色);上列，线程Treg_3;下面一路上，线程Treg_4。文化背景与所有其他簇中会上面的暗示有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一组符号秩检验

平面图3 与身心健康献血者相比之下，困难重重亦非快者遗忘treg的GITR增大。每个遗忘CD4+T肝细胞元簇(遗忘T肝细胞_1;遗忘T cell_2;遗忘T cell_3;CD49b +遗忘T肝细胞;HLA-DR + GITR +遗忘T肝细胞;线程Treg_2;线程Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)样品每个暗示上面的叠加。(a,b)来自HD (a)和S (b)表头的暗示热平面图(sp606不包括在内)。(c,d)遗忘Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)的FlowSOM GITR暗示串联，结果显示直方平面图(c)和汇总平面图(d)。Wilcoxon一组符号秩和检验，p< 0.07(蓝色)所有遗传物质包括，p< 0.05(蓝色)遗传物质SP 606和反之亦然的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR暗示，从分级旁路，从所有HD(灰色)、所有SP(蓝色)和SP 606(蓝色)串联，结果显示直方平面图(e)和汇总平面图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一组符号秩检验

平面图4 来自亦非快困难重重的CD4+ treg肝细胞控制现象CD4+T肝细胞的潜能提高。SP分组用蓝色的新线和白点暗示，HD分组用红色的新线和白点暗示，蓝色的新线/白点暗示遗传物质sp606。选用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被上面为CFSE, Treg按掩蔽的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞法术样品。(a-d)与CD4+反之亦然者相对不应的treg培育(自质)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD反之亦然者培育。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE减缓平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的减缓平均值。选用非典型对照(酪氨酸的响不应肝细胞另有treg)量化减缓平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

平面图5 现象CD4+T肝细胞对亦非快困难重重的T肝细胞活化的减缓越来越引人注目。SP分组用蓝色的新线和白点暗示，HD分组用红色的新线和白点暗示，蓝色的新线/白点暗示遗传物质sp606。选用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T肝细胞透过分选。CD4+CD25−(反之亦然者)被cfsel上面，treg按掩蔽的比重指示剂。用抗CD3 /28微珠活化肝细胞，培育3天后透过流式肝细胞法术(CD25反染)和肝细胞因侄归纳。HD Treg与HD、SP或sp606反之亦然者一同培育。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE减缓平均值(b)。(c,d) CD25减缓平均值(c)和CD134减缓平均值(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育中会的暗示。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差归纳。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得单单的得出结论是，来自亦非快困难重重侄的活化遗忘CD4+Treg在GITR暗示中会得到了扩展和丰富，强调了全面研究Treg在1改进型心血管疾病安全性有机质中会的差异性的有效性。

文中单单处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28